
時間:2021-09-23瀏覽次數:6846
實驗意義
熒光定量 PCR(Realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR)也稱作實時熒光定量 PCR。就是在PCR的擴增過程中,通過熒光的信號,對PCR的進程進行實時的定性、定量檢測,最后通過標準曲線對初始模板進行定量分析的方法。
檢測方式有SYBR Green染料法和Taqman探針法兩種方式。
探針法與染料法的優缺點
1. 探針法通過探針可以增加反應收集信號的特異性,只有探針結合的片段上發生擴增才能收集到信號,能夠用多重體系反應的方法,能夠預測和提前進行反應條件的優化,缺點是要合成探針,成本高,周期長。
2. 染料法經濟實惠,可以做溶解曲線,分析全部PCR產物的TM值,缺點就是特異性沒有探針法好。
結果展示



實驗周期及交付標準
1. SYBR Green染料法
實驗周期:1-2周
交付標準:擴增曲線、溶解曲線、Ct值、引物、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)
2. Taqman探針法
實驗周期:1個月左右
交付標準:拷貝數(絕對定量)、擴增曲線、標準曲線(絕對定量)、樣品統計分析、探針及其序列實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器、原始數據等)
需確認的信息
1. 目的基因及種屬
2. 樣本種屬及類型(組織、細胞、血清等)
3. 樣本數量
4. 是否提供引物
5. 數據統計與分析要求

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