免疫熒光 

免疫熒光技術又稱為熒光抗體技術，將熒光標記技術和免疫學方法結合起來，利用抗原抗體相互作用從而對組織或細胞內的抗原或抗體物質進行定位、示蹤、定性以及相對定量等。

實驗意義  

1.免疫熒光技術特異性強、敏感性高、反應速度快、結果清晰明確，在臨床檢驗和科學研究工作上有很高的應用價值。

2.操作簡便，便于推廣。

實驗步驟  

1.石蠟切片免疫熒光：

①烘箱內進行烘片，然后將切片進行常規脫蠟至水；

②抗原修復：使用水浴鍋或電爐煮沸熱修復，或者中檔微波修復，緩沖液為0.01M檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）；

③去除內源性酶：3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性后，PBS清洗3次×3 min；

④封閉：5~10%正常血清封閉30 min；

⑤一抗孵育：稀釋好的一抗4℃孵育過夜，PBS清洗3次×3 min；

⑥二抗孵育：將稀釋好的帶熒光標記的二抗，搖床緩慢孵育1 h，PBS清洗3次×3 min；

⑦DAPI復染核，PBS清洗3次×3 min；

⑧封片：Mounting Medium封片，凝固后拍照。（多重熒光染色：可使用綠色熒光、紅色熒光和藍色熒光進行三重熒光染色）。

2. 冰凍切片免疫熒光：

①新鮮組織經處理后，立即在恒冷冰凍切片機內切片，厚度為5~6 μm；

②防脫玻片，貼片，室溫陰干約12 h；

③4℃純丙酮10 min處理，風干；

④PBS漂洗3次×10 min；

⑤0.3%Trion-100溶液37℃3次×10min；

④PBS漂洗3次×5 min；

⑥去除內源性酶；

⑦封閉、一抗孵育、二抗孵育、復染核、封片等與石蠟切片的處理類似，同樣也可做多重熒光染色。

結果展示  

實驗完成周期及交付標準 

1. 實驗周期：1-2周

2. 交付標準：蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告（實驗步驟、試劑、儀器等）

需確認的信息 

1.是做石蠟切片還是冰凍切片（推介做石蠟切片）

2. 樣本的種屬和類型，是組織還是細胞？

3. 樣本的數量

4. 是否提供一抗，我方可代購

5. 半定量分析要求

6. 拍照要求

文獻參考  

[1] Cohen M , Varki N M , Jankowski M D , et al. Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution[J]. Journal of Visualized Experiments Jove, 2012, 67(67):e3928-e3928.

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