甲基化檢測

DNA的甲基化（Methylation）是最早發現的基因表觀修飾之一，甲基化僅修飾胞嘧啶，DNA的甲基化修飾是在DNA甲基化轉移酶的作用下使CpG雙核苷酸5'端的胞嘧啶轉變為5'-甲基胞嘧啶，由于CpG島主要位于基因的啟動子和第一外顯子區域，其甲基化修飾通常抑制基因的表達，去甲基化后基因重新活化和表達。DNA甲基化修飾方式在不改變基因序列的前提下實現對基因表達的調控。

主要檢測方式

1. MSP: 甲基化特異性PCR（Methylation-specific PCR）即用亞.硫.酸氫鹽處理基因組DNA，未甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶不會發生改變，設計針對甲基化序列的引物進行PCR擴增，然后通過電泳等檢測手段檢測MSP擴增產物來確定位點是否存在甲基化。

2. BSP：亞.硫.酸.氫鹽測序法（Bisulfite sequencing PCR）與MSP相似，用亞.硫.酸.氫鹽將未甲基化胞嘧啶轉化為尿嘧啶，設計BSP引物進行PCR，擴增中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶，對PCR產物進行測序來判斷CpG位點是否甲基化。

3. HRM：高分辨率溶解曲線法（High Resolution Melting）原理也是用亞.硫.酸氫鹽處理，未甲基化的胞嘧啶經PCR擴增變成胸腺嘧啶，樣品中的GC含量發生變化從而溶解溫度發生變化，從而確定位點是否發生甲基化。

基于限制性內切酶的測序方法：

1. 靶向富集甲基化位點的測序方法

2. SMRT測序法

結果展示

Assay Name: miR-152-S1(8CpG)

Sample ID: Si

Note: 

Assay Name: miR-152-S1(8CpG)

Sample ID: NC

Note: 

實驗完成周期及交付標準

1. 實驗周期：3-5周

2. 交付標準：甲基化檢測結果、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等）

需確認的信息

1. 目的基因及種屬

2. 樣本類型（細胞、組織、血液等）

3. 目的基因片段

參考文獻

[1] Sato S , Uemoto Y , Kikuchi T , et al. SNP- and haplotype-based genome-wide association studies for growth, carcass, and meat quality traits in a Duroc multigenerational population[J]. Bmc Genetics, 2016, 17(1):60.

[2] Ichikawa K , Tomioka S , Suzuki Y , et al. Centromere evolution and CpG methylation during vertebrate speciation[J]. Nature Communications, 2017, 8(1):1833.

[3] Yang Y , Scott S A . DNA Methylation Profiling Using Long-Read Single Molecule Real-Time Bisulfite Sequencing (SMRT-BS)[J]. Methods Mol Biol, 2017, 1654:125-134.

[4] Yang Y , Sebra R , Pullman B S , et al. Quantitative and multiplexed DNA methylation analysis using long-read single-molecule real-time bisulfite sequencing (SMRT-BS).[J]. Bmc Genomics, 2015, 16(1):350.

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