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Caspase3
【晶萊生物】Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也稱CPP32，是細胞凋亡過程中的一個關鍵酶，可以剪切procaspase 2、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase)，ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease)，gelsolin和fodrin等。這些由caspase 3介導的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。caspase 3在細胞核凋亡過程中也起到了關鍵作用，包括染色質固縮，DNA片段化等。同時caspase 3對細胞起泡(Cell blebbing)也起到關鍵作用。
檢測原理基于casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA產生黃色的pNA (p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 3的活性。pNA在405nm附近有強吸收。參照黃色產物pNA制作的標準曲線，可以作為定量caspase 3酶活性的標準品。
Caspase-8
Caspase 8通常以酶原的形式存在，在細胞凋亡的信號轉導過程中被激活，Caspase 8被認為是細胞凋亡信號轉導過程中上游的caspase，在Fas-receptor和TNFR-1介導的細胞凋亡過程中caspase 8被激活，形成一個由p18和p10組成的二聚體，進一步激活下游的caspase 4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。
本方法基于Caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA產生黃色的pNA (p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 檢測樣本的405nm OD值參照pNA制作的標準曲線，可以計算樣品的Caspase 8酶活性。
Caspase-9
Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6，是細胞凋亡信號轉導過程中上游的caspase。線粒體釋放細胞色素c以后，caspase 9可以和細胞色素c以及Apaf1形成復合物，同時被激活。激活的caspase 9可以激活細胞凋亡的最關鍵酶caspase 3，從而促進后續的細胞凋亡信號。Caspase 9的激活可以通過磷酸化進行調控。
本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA產生黃色的pNA (p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 檢測樣本的405nm OD值參照pNA制作的標準曲線，可以計算樣品的Caspase 9酶活性。
Caspase1
Caspase2
Caspase4
Caspase6
凋亡因子Caspase-3/8/9檢測樣本準備：
1）細胞樣品：取1×107個細胞（約1個T25的培養瓶細胞量），600g 4℃離心5分鐘收集細胞，小心吸除上清，PBS洗滌一次。吸取上清后，每管細胞樣品加入100ul裂解液重懸沉淀，冰浴裂解15分鐘。4℃ 16,000g離心10-15分鐘，把上清轉移到冰浴預冷的離心管中。立即測定caspase 3的酶活性或-70℃保存樣品。同時可以取少量樣品用Bradford法測定蛋白濃度，盡量使蛋白濃度達到1-3mg/ml。
2）組織樣品：約每10mg組織加入100ul裂解液，在冰浴上用玻璃勻漿器勻漿。然后把勻漿液轉移到1.5ml離心管中，冰浴再裂解5分鐘。4℃ 16,000g離心10-15分鐘，把上清轉移到冰浴預冷的離心管中。立即測定caspase 3的酶活性或-70℃保存樣品。同時可以取少量樣品用Bradford法測定蛋白濃度，盡量使蛋白濃度達到1-3mg/ml。
Caspase-3活性檢測標準曲線
實驗周期：7-10個工作日內完成，重復檢測優惠。
客戶注意事項
1、抗體：事先咨詢晶萊生物，明確抗體種屬以及是否有該抗體可使用，如無可由雙方協商而定，客戶自己購買提供或我公司代購；
2、標本收集與保存：
組織樣品 新鮮組織放入液氮或-70度保存，組織不少于100mg（約綠豆大小）；
培養細胞 通過細胞計數取不少于2000000個細胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑，混勻后保存于冰箱（-70℃，避免反復凍融）；
血液細胞標本 以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護劑，保存（-70℃可長期保存，避免反復凍融）
血清或細胞培養液標本 離心去掉雜質后取上清入EP管，保存（以上4℃可保存15-20天，-70℃可長期保存，避免反復凍融）
3、樣本運輸：可選以下任何的一種方式寄送標本
組織樣本、細胞樣本以干冰運輸或加入蛋白保護劑后加冰袋運輸；
細胞樣本也可以直接快件寄送培養瓶（密封保證不污染，培養液不漏出，細胞不要長得太滿，50%左右，灌滿培養液）；
血清或上清液直接加冰袋寄送（密封保證液體不漏出，視路途遠近2-3天可到達）。
晶萊生物服務流程
晶萊生物實驗服務項目
| 動物實驗 | 細胞生物學 | 病理實驗 |
| 消化系統模型 | 細胞培養 | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通細胞株 | HE染色 |
| 膿毒癥模型 | 細胞缺氧培養 | 油紅O染色 |
| 胃潰瘍模型 | 細胞培養+支架 | 番紅固綠染色 |
| 胰腺炎模型 | 干細胞培養 | Masson染色 |
| 肝纖維化模型 | 原代細胞分離/提取/培養 | 天狼猩紅染色 |
| DIO肥胖模型 | 細胞轉染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 膽結石模型 | Trans well共培養 | 阿利新藍染色 |
| 結腸炎(UC)模型 | 細胞增殖 | 甲苯胺藍染色 |
| 脂肪肝模型 | 細胞計數 | 尼氏染色 |
| 急性肝損傷模型 | 生長曲線測定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代謝系統疾病模型 | 存活曲線測定 | 普魯士藍染色 |
| 骨質疏松模型 | ccK-8增殖檢測 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖檢測 | EVG染色 |
| 高尿酸血癥模型 | CFSE檢測增殖-流式檢測 | VonKossa染色 |
| 呼吸系統模型 | BrDU檢測-免疫熒光法 | 剛果紅染色 |
| 肺纖維化模型 | 細胞凋亡 | 蘇丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式檢測細胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺損傷模型 | WB檢測凋亡相關蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射電鏡觀察凋亡小體 | 革蘭氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB顯色) | AB-PAS染色 |
| 支氣管炎模型 | Tunel(熒光法,含試劑盒) | 亞甲基藍染色 |
| 泌尿生殖系統模型 | DNA ladder法 | 苯胺藍染色 |
| 慢性腎衰模型 | 細胞周期 | 熒光 DAPI染色 |
| 急性腎衰模型 | 細胞顯微計數 | 普魯士藍染色 |
| 腎間質纖維化模型 | PI染色 | 間苯二酚堿性品紅染色 |
| 腎結石模型 | BrdU滲入法 | 銀染 |
| 腎炎模型 | 免疫熒光染色 | 黑色素染色 |
| 子宮內膜異位癥模型 | PI流式檢測細胞周期 | 鍍銀染色 |
| 心血管系統模型 | 細胞運動 | PASM 六胺銀染色 |
| 冠心病模型 | Transwell檢測細胞遷移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell檢測細胞侵襲 | 富爾根染色 |
| 心臟驟停模型 | 細胞劃痕 | 亞甲基藍染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 細胞克隆 | 碘-碘化鉀染色 |
| 動脈粥樣硬化模型 | 集落形成法/稀釋鋪板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 軟瓊脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血壓模型 | 毛細管克隆法 | 改良苯酚品紅染色 |
| 神經系統模型 | 體外實驗血管生成 | 網狀纖維染色 |
| 腦卒中模型 | 磁珠分選細胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性腦梗死模型 | 流式分選細胞 | 鍍銀染色 |
| 腦出血模型 | 開機費 | movat五色染色 |
| 腦損傷模型 | 單色 | 維多利亞藍染色 |
| 脊髓損傷模型 | 雙色 | 免疫組化 |
| 帕金森模型 | CBA多細胞因子流式檢測 | 免疫組化預式 |
| 老年癡呆模型 | 組織/血液細胞制備 | 免疫組化正式 |
| 應激模型 | 組織單細胞制備 | 免疫熒光（石蠟-單標） |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒細胞提取 | 免疫熒光（石蠟-雙標） |
| 骨折模型 | 其他樣本細胞制備（如血液等） | 免疫熒光（石蠟-三標） |
| 骨缺損模型 | 外周血PBMC分離 | 免疫熒光（冰凍-單標） |
| 風濕免疫性關節炎模型 | 線粒體組學 | 免疫熒光（冰凍-雙標） |
| 骨關節炎模型 | 線粒體膜電位檢測-流式法 | 制片前處理 |
| 五官疾病模型 | 線粒體膜電位檢測-免疫熒光法 | 石蠟組織包埋 |
| 眼科疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--流式 | 特殊包埋（細胞、材料、眼球等） |
| 鼻腔疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--免疫熒光 | 軟化（肝硬化、皮膚結痂、植物等） |
| 皮膚疾病模型 | 線粒體通透性轉換孔（mPTP） | 骨組織脫鈣（小） |
| 皮膚損傷模型 | 溶酶體免疫熒光法 | 骨組織脫鈣（大） |
| 腫瘤疾病模型 | 線粒體+溶酶體共定位 | 骨組織EDTA脫鈣（小） |
| 原位瘤模型 | 內質網 | 骨組織EDTA脫鈣（大） |
| 轉移瘤模型 | 線粒體鈣瞬時變化檢測-流式 | 石蠟白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP檢測 | 細胞爬片 |
| ADP檢測 | ||
| AMP檢測 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量檢測 | 基因編輯工具 |
| 組織細胞懸液處理 | pcr檢測mRNA | 合成（3保1）片段/質粒/引物合成 |
| 細胞處理 | microRNA檢測 | 質粒載體構建 |
| 血液標本處理 | LncRNA表達量的檢測 | 過表達腺病毒載體構建包裝 |
| 細胞刺激培養 | CirRNA表達量的檢測 | shRNA腺病毒載體構建包裝 |
| 單色檢測 | 凝膠電泳 | 過表達慢病毒載體構建包裝 |
| 雙色檢測 | 基因合成 | shRNA慢病毒載體構建包裝 |
| Annexin V/PI凋亡 | ＜300 | 過表達腺相關病毒載體構建包裝 |
| 細胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒載體構建包裝 |
| 1500 - 5000 | 穩轉細胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 組織勻漿處理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA（不含試劑盒）48T/kit | WB檢測一（10孔膜/指標） | mRNA引物設計及合成 |
| ELISA（不含試劑盒）96T/kit | 灰度值分析及作圖一（10孔膜/指標） | miRNA引物設計及合成 |
| ELISA（含國產試劑盒）48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物設計及合成 |
| ELISA（含國產試劑盒）96T/kit | WB檢測二（10孔膜/指標） | CircRNA引物設計及合成 |
| 灰度值分析及作圖二（10孔膜/指標） | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
收費標準/服務周期/提供結果：
歡迎咨詢詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
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