Caspase3
       【晶萊生物】Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也稱CPP32，是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵酶，可以剪切procaspase 2、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase)，ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease)，gelsolin和fodrin等。這些由caspase 3介導(dǎo)的蛋白剪切是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的重要組成部分。caspase 3在細(xì)胞核凋亡過(guò)程中也起到了關(guān)鍵作用，包括染色質(zhì)固縮，DNA片段化等。同時(shí)caspase 3對(duì)細(xì)胞起泡(Cell blebbing)也起到關(guān)鍵作用。
       檢測(cè)原理基于casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA (p-nitroaniline)，從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)caspase 3的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。參照黃色產(chǎn)物pNA制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以作為定量caspase 3酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。

Caspase-8
       Caspase 8通常以酶原的形式存在，在細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中被激活，Caspase 8被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中上游的caspase，在Fas-receptor和TNFR-1介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程中caspase 8被激活，形成一個(gè)由p18和p10組成的二聚體，進(jìn)一步激活下游的caspase 4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。 
       本方法基于Caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA (p-nitroaniline)，從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。 檢測(cè)樣本的405nm OD值參照pNA制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計(jì)算樣品的Caspase 8酶活性。

Caspase-9
       Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6，是細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中上游的caspase。線粒體釋放細(xì)胞色素c以后，caspase 9可以和細(xì)胞色素c以及Apaf1形成復(fù)合物，同時(shí)被激活。激活的caspase 9可以激活細(xì)胞凋亡的最關(guān)鍵酶caspase 3，從而促進(jìn)后續(xù)的細(xì)胞凋亡信號(hào)。Caspase 9的激活可以通過(guò)磷酸化進(jìn)行調(diào)控。
       本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA產(chǎn)生黃色的pNA (p-nitroaniline)，從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。 檢測(cè)樣本的405nm OD值參照pNA制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計(jì)算樣品的Caspase 9酶活性。

Caspase1
Caspase2
Caspase4
Caspase6

凋亡因子Caspase-3/8/9檢測(cè)樣本準(zhǔn)備：
1）細(xì)胞樣品：取1×10⁷個(gè)細(xì)胞（約1個(gè)T25的培養(yǎng)瓶細(xì)胞量），600g 4℃離心5分鐘收集細(xì)胞，小心吸除上清，PBS洗滌一次。吸取上清后，每管細(xì)胞樣品加入100ul裂解液重懸沉淀，冰浴裂解15分鐘。4℃ 16,000g離心10-15分鐘，把上清轉(zhuǎn)移到冰浴預(yù)冷的離心管中。立即測(cè)定caspase 3的酶活性或-70℃保存樣品。同時(shí)可以取少量樣品用Bradford法測(cè)定蛋白濃度，盡量使蛋白濃度達(dá)到1-3mg/ml。
2）組織樣品：約每10mg組織加入100ul裂解液，在冰浴上用玻璃勻漿器勻漿。然后把勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，冰浴再裂解5分鐘。4℃ 16,000g離心10-15分鐘，把上清轉(zhuǎn)移到冰浴預(yù)冷的離心管中。立即測(cè)定caspase 3的酶活性或-70℃保存樣品。同時(shí)可以取少量樣品用Bradford法測(cè)定蛋白濃度，盡量使蛋白濃度達(dá)到1-3mg/ml。
 
Caspase-3活性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線
實(shí)驗(yàn)周期：7-10個(gè)工作日內(nèi)完成，重復(fù)檢測(cè)優(yōu)惠。

客戶注意事項(xiàng)
1、抗體：事先咨詢晶萊生物，明確抗體種屬以及是否有該抗體可使用，如無(wú)可由雙方協(xié)商而定，客戶自己購(gòu)買提供或我公司代購(gòu)；
2、標(biāo)本收集與保存：
組織樣品  新鮮組織放入液氮或-70度保存，組織不少于100mg（約綠豆大?。?br/>培養(yǎng)細(xì)胞  通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2000000個(gè)細(xì)胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，混勻后保存于冰箱（-70℃，避免反復(fù)凍融）；
血液細(xì)胞標(biāo)本  以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，保存（-70℃可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融）
血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本  離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管，保存（以上4℃可保存15-20天，-70℃可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融）
3、樣本運(yùn)輸：可選以下任何的一種方式寄送標(biāo)本
組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后加冰袋運(yùn)輸；
細(xì)胞樣本也可以直接快件寄送培養(yǎng)瓶（密封保證不污染，培養(yǎng)液不漏出，細(xì)胞不要長(zhǎng)得太滿，50%左右，灌滿培養(yǎng)液）；
血清或上清液直接加冰袋寄送（密封保證液體不漏出，視路途遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá)）。

晶萊生物服務(wù)流程


晶萊生物實(shí)驗(yàn)服務(wù)項(xiàng)目

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
歡迎咨詢?cè)斦?，我們?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請(qǐng)瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容，或來(lái)電咨詢！

做實(shí)驗(yàn)，找晶萊！您的科研生涯，我們一路相伴！
【平臺(tái)項(xiàng)目開展范圍】慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實(shí)驗(yàn)，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)，芯片類實(shí)驗(yàn)，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請(qǐng)指導(dǎo)、SCI、核心期刊等服務(wù)。