時間：2021-09-28瀏覽次數(shù)：4059
原位雜交技術(shù)應(yīng)用于染色體、細(xì)胞和組織切片等樣品中進(jìn)行核酸特異性檢測，與免疫組化技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓?fù)湫畔⒔Y(jié)合起來。1969年P(guān)ardue和Gall將放射性標(biāo)記的探針直接應(yīng)用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克隆技術(shù)的發(fā)展，及不同探針標(biāo)記系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)的應(yīng)用，大大增加了原位雜交檢測的應(yīng)用靈活性和檢測靈敏度。
多種探針標(biāo)記檢測系統(tǒng)
基于異羥基洋地黃毒苷、生物素和熒光標(biāo)記分子的標(biāo)記和檢測系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測方法。
熒光標(biāo)記檢測常為直接探針標(biāo)記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進(jìn)行核酸標(biāo)記。由于標(biāo)記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過程中的考驗，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現(xiàn)的背景較低。
間接標(biāo)記的方法中應(yīng)用了報告分子標(biāo)記的探針，報告分子通過親和酶促的方法進(jìn)行顯色。常用的報告分子如異羥基洋地黃毒苷，生物素。結(jié)合異羥基洋地黃毒苷抗體或鏈霉親和素上耦聯(lián)的酶系統(tǒng)進(jìn)行間接的底物反應(yīng)檢測。異羥基洋地黃毒苷標(biāo)記核酸的歷史可追溯到1987年，由于異羥基洋地黃毒苷是洋地黃的花和葉中特有的成分，檢測時使用的異羥基洋地黃毒苷抗體不會結(jié)合于其他的生物分子。這是相較于生物素標(biāo)記系統(tǒng)的優(yōu)勢。異羥基洋地黃毒苷抗體上可耦聯(lián)堿性磷酸酶、過氧化酶，及熒光分子和膠體金等，根據(jù)不同的應(yīng)用需求，呈現(xiàn)高信噪比的核酸檢測結(jié)果。但需注意，由于引入了免疫檢測反應(yīng)，在放大檢測靈敏度的同時，應(yīng)注意樣品內(nèi)源性酶的滅活，以降低檢測背景。
通過不同標(biāo)記方法的聯(lián)合應(yīng)用，還可在同一樣本中實現(xiàn)染色體不同區(qū)域或細(xì)胞樣本中不同RNA序列的多重檢測。
原位雜交檢測步驟：
玻片的準(zhǔn)備和樣品固定
細(xì)胞或組織的預(yù)滲透處理
靶DNA變性（DNA原位雜交）
探針制備
原位雜交過程
雜交后洗滌
探針（顯色）檢測
晶萊生物服務(wù)流程
晶萊生物實驗服務(wù)項目
| 動物實驗 | 細(xì)胞生物學(xué) | 病理實驗 |
| 消化系統(tǒng)模型 | 細(xì)胞培養(yǎng) | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通細(xì)胞株 | HE染色 |
| 膿毒癥模型 | 細(xì)胞缺氧培養(yǎng) | 油紅O染色 |
| 胃潰瘍模型 | 細(xì)胞培養(yǎng)+支架 | 番紅固綠染色 |
| 胰腺炎模型 | 干細(xì)胞培養(yǎng) | Masson染色 |
| 肝纖維化模型 | 原代細(xì)胞分離/提取/培養(yǎng) | 天狼猩紅染色 |
| DIO肥胖模型 | 細(xì)胞轉(zhuǎn)染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 膽結(jié)石模型 | Trans well共培養(yǎng) | 阿利新藍(lán)染色 |
| 結(jié)腸炎(UC)模型 | 細(xì)胞增殖 | 甲苯胺藍(lán)染色 |
| 脂肪肝模型 | 細(xì)胞計數(shù) | 尼氏染色 |
| 急性肝損傷模型 | 生長曲線測定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代謝系統(tǒng)疾病模型 | 存活曲線測定 | 普魯士藍(lán)染色 |
| 骨質(zhì)疏松模型 | ccK-8增殖檢測 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖檢測 | EVG染色 |
| 高尿酸血癥模型 | CFSE檢測增殖-流式檢測 | VonKossa染色 |
| 呼吸系統(tǒng)模型 | BrDU檢測-免疫熒光法 | 剛果紅染色 |
| 肺纖維化模型 | 細(xì)胞凋亡 | 蘇丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式檢測細(xì)胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺損傷模型 | WB檢測凋亡相關(guān)蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射電鏡觀察凋亡小體 | 革蘭氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB顯色) | AB-PAS染色 |
| 支氣管炎模型 | Tunel(熒光法,含試劑盒) | 亞甲基藍(lán)染色 |
| 泌尿生殖系統(tǒng)模型 | DNA ladder法 | 苯胺藍(lán)染色 |
| 慢性腎衰模型 | 細(xì)胞周期 | 熒光 DAPI染色 |
| 急性腎衰模型 | 細(xì)胞顯微計數(shù) | 普魯士藍(lán)染色 |
| 腎間質(zhì)纖維化模型 | PI染色 | 間苯二酚堿性品紅染色 |
| 腎結(jié)石模型 | BrdU滲入法 | 銀染 |
| 腎炎模型 | 免疫熒光染色 | 黑色素染色 |
| 子宮內(nèi)膜異位癥模型 | PI流式檢測細(xì)胞周期 | 鍍銀染色 |
| 心血管系統(tǒng)模型 | 細(xì)胞運動 | PASM 六胺銀染色 |
| 冠心病模型 | Transwell檢測細(xì)胞遷移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell檢測細(xì)胞侵襲 | 富爾根染色 |
| 心臟驟停模型 | 細(xì)胞劃痕 | 亞甲基藍(lán)染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 細(xì)胞克隆 | 碘-碘化鉀染色 |
| 動脈粥樣硬化模型 | 集落形成法/稀釋鋪板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 軟瓊脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血壓模型 | 毛細(xì)管克隆法 | 改良苯酚品紅染色 |
| 神經(jīng)系統(tǒng)模型 | 體外實驗血管生成 | 網(wǎng)狀纖維染色 |
| 腦卒中模型 | 磁珠分選細(xì)胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性腦梗死模型 | 流式分選細(xì)胞 | 鍍銀染色 |
| 腦出血模型 | 開機費 | movat五色染色 |
| 腦損傷模型 | 單色 | 維多利亞藍(lán)染色 |
| 脊髓損傷模型 | 雙色 | 免疫組化 |
| 帕金森模型 | CBA多細(xì)胞因子流式檢測 | 免疫組化預(yù)式 |
| 老年癡呆模型 | 組織/血液細(xì)胞制備 | 免疫組化正式 |
| 應(yīng)激模型 | 組織單細(xì)胞制備 | 免疫熒光（石蠟-單標(biāo)） |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒細(xì)胞提取 | 免疫熒光（石蠟-雙標(biāo)） |
| 骨折模型 | 其他樣本細(xì)胞制備（如血液等） | 免疫熒光（石蠟-三標(biāo)） |
| 骨缺損模型 | 外周血PBMC分離 | 免疫熒光（冰凍-單標(biāo)） |
| 風(fēng)濕免疫性關(guān)節(jié)炎模型 | 線粒體組學(xué) | 免疫熒光（冰凍-雙標(biāo)） |
| 骨關(guān)節(jié)炎模型 | 線粒體膜電位檢測-流式法 | 制片前處理 |
| 五官疾病模型 | 線粒體膜電位檢測-免疫熒光法 | 石蠟組織包埋 |
| 眼科疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--流式 | 特殊包埋（細(xì)胞、材料、眼球等） |
| 鼻腔疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--免疫熒光 | 軟化（肝硬化、皮膚結(jié)痂、植物等） |
| 皮膚疾病模型 | 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP） | 骨組織脫鈣（小） |
| 皮膚損傷模型 | 溶酶體免疫熒光法 | 骨組織脫鈣（大） |
| 腫瘤疾病模型 | 線粒體+溶酶體共定位 | 骨組織EDTA脫鈣（?。?/span> |
| 原位瘤模型 | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) | 骨組織EDTA脫鈣（大） |
| 轉(zhuǎn)移瘤模型 | 線粒體鈣瞬時變化檢測-流式 | 石蠟白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP檢測 | 細(xì)胞爬片 |
| ADP檢測 | ||
| AMP檢測 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量檢測 | 基因編輯工具 |
| 組織細(xì)胞懸液處理 | pcr檢測mRNA | 合成（3保1）片段/質(zhì)粒/引物合成 |
| 細(xì)胞處理 | microRNA檢測 | 質(zhì)粒載體構(gòu)建 |
| 血液標(biāo)本處理 | LncRNA表達(dá)量的檢測 | 過表達(dá)腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 細(xì)胞刺激培養(yǎng) | CirRNA表達(dá)量的檢測 | shRNA腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 單色檢測 | 凝膠電泳 | 過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 雙色檢測 | 基因合成 | shRNA慢病毒載體構(gòu)建包裝 |
| Annexin V/PI凋亡 | ＜300 | 過表達(dá)腺相關(guān)病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 細(xì)胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 1500 - 5000 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 組織勻漿處理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA（不含試劑盒）48T/kit | WB檢測一（10孔膜/指標(biāo)） | mRNA引物設(shè)計及合成 |
| ELISA（不含試劑盒）96T/kit | 灰度值分析及作圖一（10孔膜/指標(biāo)） | miRNA引物設(shè)計及合成 |
| ELISA（含國產(chǎn)試劑盒）48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物設(shè)計及合成 |
| ELISA（含國產(chǎn)試劑盒）96T/kit | WB檢測二（10孔膜/指標(biāo)） | CircRNA引物設(shè)計及合成 |
| 灰度值分析及作圖二（10孔膜/指標(biāo)） | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
更多實驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容，或來電咨詢！
做實驗，找晶萊！您的科研生涯，我們一路相伴！
【平臺項目開展范圍】慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學(xué)實驗，細(xì)胞實驗，動物實驗，蛋白組學(xué)實驗，芯片類實驗，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計指導(dǎo)、基金申請指導(dǎo)、SCI、核心期刊等服務(wù)。
上一篇：雙熒光素酶報告基因檢測
下一篇：原位分子雜交實驗服務(wù)
