
時間:2021-09-29瀏覽次數:4054
條件恐懼實驗系統(FCS)用于小型嚙齒類動物(大、小鼠)環境相關條件性恐懼實驗研究。嚙齒類動物在恐懼時會表現出特有的不動狀態(immobility),動物在這種情況下傾向于保持靜止不動的防御姿勢。抗抑郁藥和抗中樞興奮藥可以明顯縮短不動狀態持續的時間。實驗過程中,實驗對象被給與一個聲音信號(條件刺激),隨后給予電擊(非條件)刺激。該訓練稱為條件性訓練,訓練結束后實驗動物進行聲音信號或環境聯系性實驗。一般情況下嚙齒類動物對相應的環境和不同環境下同樣的聲音信號都會做出明顯的條件性恐懼反應,如靜止不動。這種測試可以在訓練結束后立刻或幾天后進行可以提供在條件信號影響下短期和長期記憶的信息。
實驗方式(1)
包括三個階段
第一階段:條件性訓練(第1天)
無刺激 180s
聲音信號 30s
電擊 2s
無刺激 20s
第一階段為訓練實驗,實驗動物被給予條件性聲音刺激。
第二階段:環境相關(2天)
無刺激 180s
第二階段將實驗動物放入第一階段中的環境中以期評價環境相關的條件性恐懼程度。
第三階段:改變的環境相關信息(2天+2h)
無刺激 180s
聲音 180s
無刺激 60s
改變環境信息(比如在實驗箱中放入一個分隔板、改變光源和背景噪音或用其他溶液清洗實驗箱等)后觀察動物的條件性恐懼程度。刺激的順序由實驗者決定。
實驗結束后通過軟件分析系統對記錄的數據進行分析。
以上的實驗中,第二階段沒有給與任何刺激但是實驗動物表現出明顯的環境相關性恐懼,表現為活動性明顯減少,但是并沒有出現freezing反應。在第三階段,同一只動物在改變了環境后沒有表現出任何不動反應(活動性減少),但是在給與聲音信號后,可以觀察到明顯地條件性恐懼freezing反應。
實驗方式(2)
模型的制備:將大鼠放在動物飼養室內適應一周。飼養室內溫度為24±0.5℃,濕度為60%,光:暗周期為12h:12h(光照時間為8:00-20:00),隨機分籠單獨飼養,自由進食、飲水。
A.條件性恐懼的建立:將大鼠分別放入斯金納箱(箱子底部為銅條柵欄,可通電)內,適應2分鐘后再給予單一頻率聲音信號(4.5KHZ,60dB,30S,該聲音由美國Adobe公司的Adobe Audition2.0軟件制作)適應4次(兩次聲音間隔1-4分鐘),然后再給予6次以聲音信號為提示的不可逃避足底電擊(1mA,5s),聲音與電擊同時結束,兩次聲音間隔為1-4分鐘,共28分鐘。動物在被電擊時發生驚叫、驚跳、逃避等,聽到聲音提示時出現慌張、逃避或者僵立行為(除呼吸外無其他運動行為),這樣建成恐懼動物模型(以下簡稱建模)。實驗結束后讓動物在斯金納箱內繼續停留2分鐘后放回飼養籠飼養。每次實驗結束后用90%酒精擦拭箱底,用濕布擦拭箱壁,以避免殘留氣味對后續實驗大鼠的影響。
B.恐懼消退訓練:24h后將已經建立條件性恐懼的動物再次放入斯金納箱內,僅給予聲音信號16次,兩次聲音間隔為1-2分鐘,共24分鐘。恐懼對照組在對應的時間點放進斯金納箱內24分鐘,不進行消退訓練(不給聲音刺激)。
C.條件性恐懼消退保持測試:恐懼對照組和恐懼消退組(注:此時大鼠分為兩組:恐懼消退組和對照組)分別在恐懼消退訓練后的第1、3、7天將大鼠放在訓練箱內,給予5次聲音信號,時間間隔為0.5s,記錄3分鐘內的不僵立時間,計算3分鐘內不僵立時間百分比,作為消退保持成績。百分比越高,表明消退保持成績越好。
可記錄的數據和參數
1)Freezing相關:實驗時間、freezing總次數、每次freezing時間點、每次freezing持續時間、freezing總時間、freezing時間占總時間的百分比。
2)活動度相關:總實驗時間、總距離(cm)、總平均速度(cm/s)、每個階段的時間、距離及平均速度。
晶萊生物服務流程
晶萊生物實驗服務項目
| 動物實驗 | 細胞生物學 | 病理實驗 |
| 消化系統模型 | 細胞培養 | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通細胞株 | HE染色 |
| 膿毒癥模型 | 細胞缺氧培養 | 油紅O染色 |
| 胃潰瘍模型 | 細胞培養+支架 | 番紅固綠染色 |
| 胰腺炎模型 | 干細胞培養 | Masson染色 |
| 肝纖維化模型 | 原代細胞分離/提取/培養 | 天狼猩紅染色 |
| DIO肥胖模型 | 細胞轉染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 膽結石模型 | Trans well共培養 | 阿利新藍染色 |
| 結腸炎(UC)模型 | 細胞增殖 | 甲苯胺藍染色 |
| 脂肪肝模型 | 細胞計數 | 尼氏染色 |
| 急性肝損傷模型 | 生長曲線測定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代謝系統疾病模型 | 存活曲線測定 | 普魯士藍染色 |
| 骨質疏松模型 | ccK-8增殖檢測 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖檢測 | EVG染色 |
| 高尿酸血癥模型 | CFSE檢測增殖-流式檢測 | VonKossa染色 |
| 呼吸系統模型 | BrDU檢測-免疫熒光法 | 剛果紅染色 |
| 肺纖維化模型 | 細胞凋亡 | 蘇丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式檢測細胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺損傷模型 | WB檢測凋亡相關蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射電鏡觀察凋亡小體 | 革蘭氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB顯色) | AB-PAS染色 |
| 支氣管炎模型 | Tunel(熒光法,含試劑盒) | 亞甲基藍染色 |
| 泌尿生殖系統模型 | DNA ladder法 | 苯胺藍染色 |
| 慢性腎衰模型 | 細胞周期 | 熒光 DAPI染色 |
| 急性腎衰模型 | 細胞顯微計數 | 普魯士藍染色 |
| 腎間質纖維化模型 | PI染色 | 間苯二酚堿性品紅染色 |
| 腎結石模型 | BrdU滲入法 | 銀染 |
| 腎炎模型 | 免疫熒光染色 | 黑色素染色 |
| 子宮內膜異位癥模型 | PI流式檢測細胞周期 | 鍍銀染色 |
| 心血管系統模型 | 細胞運動 | PASM 六胺銀染色 |
| 冠心病模型 | Transwell檢測細胞遷移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell檢測細胞侵襲 | 富爾根染色 |
| 心臟驟停模型 | 細胞劃痕 | 亞甲基藍染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 細胞克隆 | 碘-碘化鉀染色 |
| 動脈粥樣硬化模型 | 集落形成法/稀釋鋪板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 軟瓊脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血壓模型 | 毛細管克隆法 | 改良苯酚品紅染色 |
| 神經系統模型 | 體外實驗血管生成 | 網狀纖維染色 |
| 腦卒中模型 | 磁珠分選細胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性腦梗死模型 | 流式分選細胞 | 鍍銀染色 |
| 腦出血模型 | 開機費 | movat五色染色 |
| 腦損傷模型 | 單色 | 維多利亞藍染色 |
| 脊髓損傷模型 | 雙色 | 免疫組化 |
| 帕金森模型 | CBA多細胞因子流式檢測 | 免疫組化預式 |
| 老年癡呆模型 | 組織/血液細胞制備 | 免疫組化正式 |
| 應激模型 | 組織單細胞制備 | 免疫熒光(石蠟-單標) |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒細胞提取 | 免疫熒光(石蠟-雙標) |
| 骨折模型 | 其他樣本細胞制備(如血液等) | 免疫熒光(石蠟-三標) |
| 骨缺損模型 | 外周血PBMC分離 | 免疫熒光(冰凍-單標) |
| 風濕免疫性關節炎模型 | 線粒體組學 | 免疫熒光(冰凍-雙標) |
| 骨關節炎模型 | 線粒體膜電位檢測-流式法 | 制片前處理 |
| 五官疾病模型 | 線粒體膜電位檢測-免疫熒光法 | 石蠟組織包埋 |
| 眼科疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--流式 | 特殊包埋(細胞、材料、眼球等) |
| 鼻腔疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--免疫熒光 | 軟化(肝硬化、皮膚結痂、植物等) |
| 皮膚疾病模型 | 線粒體通透性轉換孔(mPTP) | 骨組織脫鈣(小) |
| 皮膚損傷模型 | 溶酶體免疫熒光法 | 骨組織脫鈣(大) |
| 腫瘤疾病模型 | 線粒體+溶酶體共定位 | 骨組織EDTA脫鈣(小) |
| 原位瘤模型 | 內質網 | 骨組織EDTA脫鈣(大) |
| 轉移瘤模型 | 線粒體鈣瞬時變化檢測-流式 | 石蠟白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP檢測 | 細胞爬片 |
| ADP檢測 | ||
| AMP檢測 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量檢測 | 基因編輯工具 |
| 組織細胞懸液處理 | pcr檢測mRNA | 合成(3保1)片段/質粒/引物合成 |
| 細胞處理 | microRNA檢測 | 質粒載體構建 |
| 血液標本處理 | LncRNA表達量的檢測 | 過表達腺病毒載體構建包裝 |
| 細胞刺激培養 | CirRNA表達量的檢測 | shRNA腺病毒載體構建包裝 |
| 單色檢測 | 凝膠電泳 | 過表達慢病毒載體構建包裝 |
| 雙色檢測 | 基因合成 | shRNA慢病毒載體構建包裝 |
| Annexin V/PI凋亡 | <300 | 過表達腺相關病毒載體構建包裝 |
| 細胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒載體構建包裝 |
| 1500 - 5000 | 穩轉細胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 組織勻漿處理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA(不含試劑盒)48T/kit | WB檢測一(10孔膜/指標) | mRNA引物設計及合成 |
| ELISA(不含試劑盒)96T/kit | 灰度值分析及作圖一(10孔膜/指標) | miRNA引物設計及合成 |
| ELISA(含國產試劑盒)48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物設計及合成 |
| ELISA(含國產試劑盒)96T/kit | WB檢測二(10孔膜/指標) | CircRNA引物設計及合成 |
| 灰度值分析及作圖二(10孔膜/指標) | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
收費標準/服務周期/提供結果:
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