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| 老年癡呆 | AD阿爾茲海默癥模型 | 大/小鼠 |
| 血管性癡呆模型 | 大鼠 |
AD阿爾茲海默癥模型
原型物種：人
來源：物理方法和藥物
模式動(dòng)物品系：SPF級SD大鼠，健康，雄性，體重為250g-300g。
實(shí)驗(yàn)分組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組。
實(shí)驗(yàn)周期：4-6 weeks
建模方法
SD大鼠均采用1%戊巴Bi妥鈉40μg/g腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉后繼而固定于腦立體定位儀上。按照大鼠腦立體定位圖譜，以前囟為零起點(diǎn)，前囟后3.5 mm處為穿刺點(diǎn)，中線右側(cè)旁開2mm，而后牙科鉆鉆開顱骨，采用微量注射器自腦表面垂直進(jìn)針3mm，即：(AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm)，雙側(cè)海馬CA1區(qū)緩慢勻速注射Aβ1-40各10 μg (1 μL)，留針5 min，退針后縫合傷口。造模后3d后，開始尾靜脈注射，注射生理鹽水，大鼠每只給藥100μl/次/d，連續(xù)給藥21d后，進(jìn)行水迷宮行為學(xué)檢測。
模型評價(jià)
行為學(xué)檢測：所有組別，于給藥后21d，進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)，試驗(yàn)分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。
1. 定位航行實(shí)驗(yàn)：大鼠連續(xù)接受5天的訓(xùn)練，每天4次，每次時(shí)間間隔30min，記錄下大鼠從4個(gè)入水點(diǎn)和入水并找到平臺所需要的時(shí)間，即逃避潛伏期。4次潛伏期的平均成績作為當(dāng)日的最終結(jié)果進(jìn)入到最后統(tǒng)計(jì)。
2. 空間探索實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)的第6天，撤去平臺，從距離平臺的最遠(yuǎn)端入水后，將大鼠放入水中，記錄下30s內(nèi)大鼠的游泳軌跡，并觀察分析大鼠在目標(biāo)象限的停留時(shí)間，以及它的穿越平臺的次數(shù)。
行為學(xué)結(jié)束后，將各組大鼠摘取全腦，冰上剝?nèi)バ∧X，將剩余部分左右對切，一半放入4%多聚 J 醛中固定，用于病理學(xué)檢測。另一半取海馬用于PCR和蛋白檢測。
組織病理學(xué)
1. 尼氏染色海馬組織固定后石蠟切片，進(jìn)行尼氏染色，觀察海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量。光學(xué)顯微鏡下，計(jì)數(shù)視野下每組大鼠同一部位的神經(jīng)元數(shù)量，作統(tǒng)計(jì)分析。
2. 免疫熒光染色免疫熒光染色，觀察海馬區(qū)Aβ1-40染色情況。熒光顯微鏡下，計(jì)數(shù)視野下每組大鼠同一部位的陽性斑塊數(shù)量，作統(tǒng)計(jì)分析。
3. TUNEL染色海馬組織進(jìn)行TUNEL染色，觀察神經(jīng)元凋亡情況。熒學(xué)顯微鏡下，計(jì)數(shù)視野下每組大鼠同一部位的陽性染色數(shù)量，作統(tǒng)計(jì)分析。
標(biāo)志因子水平
1. RT-qPCR檢測收集海馬組織，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，PCR檢測caspase-3，Bcl-2和Bax的表達(dá)。
2. Western-blot檢測收集海馬組織蛋白，檢測active-caspase-3，Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)。
血管性癡呆模型
永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈大鼠于實(shí)驗(yàn)前 12 h 開始禁食,不禁水。 麻醉后將大鼠固定于實(shí)驗(yàn)臺上,消毒后沿頸正中線切開皮膚約 4~5 cm,暴露并分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈,此時(shí)需注意避免損傷迷走神經(jīng),永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈。 若有對照組,則對照組大鼠只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈而 不 結(jié) 扎, 術(shù) 后 縫 合 皮 膚、 消 毒 并 應(yīng) 用 抗 生素。 有研究將此法改良為分次進(jìn)行的永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈,即先結(jié)扎一側(cè)頸總動(dòng)脈,3 ~ 7 d后再行結(jié)扎對側(cè)頸總動(dòng)脈。 由于大鼠側(cè)支循環(huán)具有個(gè)體差異性,因此結(jié)扎頸總動(dòng)脈后所造成的卒中嚴(yán)重程度不同,腦血流量嚴(yán)重不足時(shí)可導(dǎo)致大鼠死亡。 改良后的手術(shù)方法結(jié)扎一側(cè)頸總動(dòng)脈后通過大腦側(cè)支循環(huán)逐步代償后再行結(jié)扎對側(cè)頸總動(dòng)脈,不至于使腦血流量驟然減少導(dǎo)致大鼠死亡。 該方法提高了大鼠存活率,但目前應(yīng)用較少,還需重復(fù)驗(yàn)證該方法的穩(wěn)定性及可靠性。
晶萊生物服務(wù)流程
晶萊生物實(shí)驗(yàn)服務(wù)項(xiàng)目
| 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞生物學(xué) | 病理實(shí)驗(yàn) |
| 消化系統(tǒng)模型 | 細(xì)胞培養(yǎng) | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通細(xì)胞株 | HE染色 |
| 膿毒癥模型 | 細(xì)胞缺氧培養(yǎng) | 油紅O染色 |
| 胃潰瘍模型 | 細(xì)胞培養(yǎng)+支架 | 番紅固綠染色 |
| 胰腺炎模型 | 干細(xì)胞培養(yǎng) | Masson染色 |
| 肝纖維化模型 | 原代細(xì)胞分離/提取/培養(yǎng) | 天狼猩紅染色 |
| DIO肥胖模型 | 細(xì)胞轉(zhuǎn)染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 膽結(jié)石模型 | Trans well共培養(yǎng) | 阿利新藍(lán)染色 |
| 結(jié)腸炎(UC)模型 | 細(xì)胞增殖 | 甲苯胺藍(lán)染色 |
| 脂肪肝模型 | 細(xì)胞計(jì)數(shù) | 尼氏染色 |
| 急性肝損傷模型 | 生長曲線測定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代謝系統(tǒng)疾病模型 | 存活曲線測定 | 普魯士藍(lán)染色 |
| 骨質(zhì)疏松模型 | ccK-8增殖檢測 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖檢測 | EVG染色 |
| 高尿酸血癥模型 | CFSE檢測增殖-流式檢測 | VonKossa染色 |
| 呼吸系統(tǒng)模型 | BrDU檢測-免疫熒光法 | 剛果紅染色 |
| 肺纖維化模型 | 細(xì)胞凋亡 | 蘇丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式檢測細(xì)胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺損傷模型 | WB檢測凋亡相關(guān)蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射電鏡觀察凋亡小體 | 革蘭氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB顯色) | AB-PAS染色 |
| 支氣管炎模型 | Tunel(熒光法,含試劑盒) | 亞甲基藍(lán)染色 |
| 泌尿生殖系統(tǒng)模型 | DNA ladder法 | 苯胺藍(lán)染色 |
| 慢性腎衰模型 | 細(xì)胞周期 | 熒光 DAPI染色 |
| 急性腎衰模型 | 細(xì)胞顯微計(jì)數(shù) | 普魯士藍(lán)染色 |
| 腎間質(zhì)纖維化模型 | PI染色 | 間苯二酚堿性品紅染色 |
| 腎結(jié)石模型 | BrdU滲入法 | 銀染 |
| 腎炎模型 | 免疫熒光染色 | 黑色素染色 |
| 子宮內(nèi)膜異位癥模型 | PI流式檢測細(xì)胞周期 | 鍍銀染色 |
| 心血管系統(tǒng)模型 | 細(xì)胞運(yùn)動(dòng) | PASM 六胺銀染色 |
| 冠心病模型 | Transwell檢測細(xì)胞遷移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell檢測細(xì)胞侵襲 | 富爾根染色 |
| 心臟驟停模型 | 細(xì)胞劃痕 | 亞甲基藍(lán)染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 細(xì)胞克隆 | 碘-碘化鉀染色 |
| 動(dòng)脈粥樣硬化模型 | 集落形成法/稀釋鋪板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 軟瓊脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血壓模型 | 毛細(xì)管克隆法 | 改良苯酚品紅染色 |
| 神經(jīng)系統(tǒng)模型 | 體外實(shí)驗(yàn)血管生成 | 網(wǎng)狀纖維染色 |
| 腦卒中模型 | 磁珠分選細(xì)胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性腦梗死模型 | 流式分選細(xì)胞 | 鍍銀染色 |
| 腦出血模型 | 開機(jī)費(fèi) | movat五色染色 |
| 腦損傷模型 | 單色 | 維多利亞藍(lán)染色 |
| 脊髓損傷模型 | 雙色 | 免疫組化 |
| 帕金森模型 | CBA多細(xì)胞因子流式檢測 | 免疫組化預(yù)式 |
| 老年癡呆模型 | 組織/血液細(xì)胞制備 | 免疫組化正式 |
| 應(yīng)激模型 | 組織單細(xì)胞制備 | 免疫熒光（石蠟-單標(biāo)） |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒細(xì)胞提取 | 免疫熒光（石蠟-雙標(biāo)） |
| 骨折模型 | 其他樣本細(xì)胞制備（如血液等） | 免疫熒光（石蠟-三標(biāo)） |
| 骨缺損模型 | 外周血PBMC分離 | 免疫熒光（冰凍-單標(biāo)） |
| 風(fēng)濕免疫性關(guān)節(jié)炎模型 | 線粒體組學(xué) | 免疫熒光（冰凍-雙標(biāo)） |
| 骨關(guān)節(jié)炎模型 | 線粒體膜電位檢測-流式法 | 制片前處理 |
| 五官疾病模型 | 線粒體膜電位檢測-免疫熒光法 | 石蠟組織包埋 |
| 眼科疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--流式 | 特殊包埋（細(xì)胞、材料、眼球等） |
| 鼻腔疾病模型 | 線粒體ROS生物含量檢測--免疫熒光 | 軟化（肝硬化、皮膚結(jié)痂、植物等） |
| 皮膚疾病模型 | 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP） | 骨組織脫鈣（小） |
| 皮膚損傷模型 | 溶酶體免疫熒光法 | 骨組織脫鈣（大） |
| 腫瘤疾病模型 | 線粒體+溶酶體共定位 | 骨組織EDTA脫鈣（小） |
| 原位瘤模型 | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) | 骨組織EDTA脫鈣（大） |
| 轉(zhuǎn)移瘤模型 | 線粒體鈣瞬時(shí)變化檢測-流式 | 石蠟白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP檢測 | 細(xì)胞爬片 |
| ADP檢測 | ||
| AMP檢測 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量檢測 | 基因編輯工具 |
| 組織細(xì)胞懸液處理 | pcr檢測mRNA | 合成（3保1）片段/質(zhì)粒/引物合成 |
| 細(xì)胞處理 | microRNA檢測 | 質(zhì)粒載體構(gòu)建 |
| 血液標(biāo)本處理 | LncRNA表達(dá)量的檢測 | 過表達(dá)腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 細(xì)胞刺激培養(yǎng) | CirRNA表達(dá)量的檢測 | shRNA腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 單色檢測 | 凝膠電泳 | 過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 雙色檢測 | 基因合成 | shRNA慢病毒載體構(gòu)建包裝 |
| Annexin V/PI凋亡 | ＜300 | 過表達(dá)腺相關(guān)病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 細(xì)胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒載體構(gòu)建包裝 |
| 1500 - 5000 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 組織勻漿處理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA（不含試劑盒）48T/kit | WB檢測一（10孔膜/指標(biāo)） | mRNA引物設(shè)計(jì)及合成 |
| ELISA（不含試劑盒）96T/kit | 灰度值分析及作圖一（10孔膜/指標(biāo)） | miRNA引物設(shè)計(jì)及合成 |
| ELISA（含國產(chǎn)試劑盒）48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物設(shè)計(jì)及合成 |
| ELISA（含國產(chǎn)試劑盒）96T/kit | WB檢測二（10孔膜/指標(biāo)） | CircRNA引物設(shè)計(jì)及合成 |
| 灰度值分析及作圖二（10孔膜/指標(biāo)） | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
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