子宮內(nèi)膜癌(carcinoma of the endometrium），又稱為子宮體癌（carcinoma of the corpus uteri），是婦科常見的惡性腫瘤，僅次于子宮頸癌。

子宮內(nèi)膜癌類器官是從患者子宮內(nèi)膜癌組織中提取細(xì)胞，在體外培養(yǎng)形成的三維結(jié)構(gòu)，能夠模擬原發(fā)腫瘤的基因突變和表達(dá)特征。這些類器官可用于藥物篩選和疾病建模，是研究子宮內(nèi)膜癌的重要工具。例如，研究發(fā)現(xiàn)，通過阻斷患者來源的異種移植物（PDX）中激活的FGFR2c，使用FGFR2c抑制劑可導(dǎo)致顯著的腫瘤生長抑制，治療后的小鼠存活率顯著增加。此外，Girda等使用無血清的新型培養(yǎng)模式，成功對子宮內(nèi)膜癌組織來源的類器官進(jìn)行構(gòu)建及傳代，并使用雌激素類似物對其進(jìn)行敏感度測試，發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌類器官對雌激素產(chǎn)生了濃度依賴性的反應(yīng)。 

子宮內(nèi)膜著床失敗是不育的重要原因，但目前對于其背后的機制尚不明確，主要是缺乏能夠構(gòu)建有組織的子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)并在體外重現(xiàn)著床過程的技術(shù)。

盡管已經(jīng)有了子宮內(nèi)膜類器官，但它們僅由上皮細(xì)胞構(gòu)成，且其頂端面向內(nèi)部，阻礙了胚泡附著。此外，這些類器官被嵌入在細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）中，這可能阻礙胚泡與上皮細(xì)胞的直接接觸。

構(gòu)建頂端向外的小鼠子宮內(nèi)膜類器官的步驟

1.. 小鼠子宮組織分離

- 使用膠原酶和DNase I在無Ca2?/Mg2?的PBS中消化30分鐘，37°C水浴，100bpm搖晃

- 用冰冷PBS稀釋至15ml，收集上皮細(xì)胞分?jǐn)?shù)

獲得子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞（EECs）和基質(zhì)細(xì)胞（ESCs）的分離物

2. 細(xì)胞培養(yǎng)

- 將分離的細(xì)胞重新懸浮在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，并離心兩次

- 將上皮細(xì)胞分?jǐn)?shù)與基質(zhì)細(xì)胞分?jǐn)?shù)混合，接種到12孔培養(yǎng)板中，每孔1ml擴(kuò)增培養(yǎng)基（不涂任何涂層）

- 37°C，5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第1、3、5天更換培養(yǎng)基

細(xì)胞開始在培養(yǎng)板邊緣向中心自然聚集，形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)

3. 聚集體的收集與再接種

- 第3天，用1000μl移液管收集環(huán)狀聚集體到1.5ml管中，通過剪短尖端的200μl移液管吹打分散成小聚集體

- 將小聚集體重新接種到同一培養(yǎng)皿中

EECs傾向于位于外圍，ESCs占據(jù)內(nèi)部

4. 轉(zhuǎn)移到低黏附培養(yǎng)皿

- 第7天，將每個聚集體分別挑出，并在96孔低黏附U型底培養(yǎng)皿中用擴(kuò)張培養(yǎng)基培養(yǎng)

- 每兩天更換一次培養(yǎng)基

經(jīng)過3天懸浮培養(yǎng)（第10天），類器官形成

5. 懸浮培養(yǎng)以促進(jìn)類器官形成

懸浮培養(yǎng)過程中，覆蓋外表面的透明層逐漸增厚，最終完全包裹整個聚集體

類器官外層由EECs組成，內(nèi)層由ESCs填充，形成頂端向外的結(jié)構(gòu)

6. 激素處理以誘導(dǎo)接受狀態(tài)

使用雌二醇（E2）、cAMP和醋酸甲地孕酮（MPA）處理類器官48小時

類器官對激素有響應(yīng)，可模擬體內(nèi)子宮內(nèi)膜的接受狀態(tài)

7. 與胚泡共培養(yǎng)

將處理后的類器官與從GFP轉(zhuǎn)基因小鼠獲得的胚泡在低黏附U型底培養(yǎng)皿中共培養(yǎng)

觀察胚泡附著、上皮內(nèi)陷、吞噬作用和侵入等著床過程